抗精子抗体怎么检查啊

抗精子抗体是指男性或者女性，对男性精液有抵抗作用，使精子无法正常和卵子结合，导致不孕不育的发生。抗精子抗体是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，其确切原因尚未完全明了。那么，抗精子抗体怎么检查啊？

1、酶联免疫吸附试验

（1）精子抗原制备：筛选收集精液常规检查正常的精液，用生理盐水反复离心洗涤，尽可能除去精浆，经超声波超声粉碎，10～15min高速离心，吸上清，测定上清液蛋白浓度，将蛋白浓度稀释为3.5～5.0μg/mL，为精子抗原溶液。

（2）反应板包被抗原：将人精子抗原稀释成3.5～5μg/mL，包被液加到聚氯乙烯微量测定板内，每孔100μL，置4℃冰箱过夜。

（3）封闭处理：次日早晨，倾去抗原溶液，用洗涤PBS洗3次，每次5min，每次洗涤后都要将板在纸上拍干，再加入1%的聚乙烯醇溶液200μL封闭，置室温1h后同上法洗涤。

（4）加待测样品：样品用PBS稀释100倍，每孔加入100μL，同时加As-Ab血清及正常处女血清作分别阳性和阴性对照，置37℃温育1h，同上法洗涤。

（5）加酶结合物：HRP-ProteinA以1∶640稀释，每孔加入100μL，置室温1h，同上洗涤。

（6）酶反应：加新鲜配制的OPD底物溶液，每孔加入50μL，置室温暗处10min，再加10%H2SO4终止液每孔50μL。

（7）结果判定：用酶标测定仪490μm测其OD值，OD值≥2.0时为阳性。

2、生物素-亲和素酶联免疫吸附试验

（1）在40孔微量测定板中加入2～6μg/mL人精子膜抗原包被液，每孔100μL，4℃过夜。加1%聚乙烯醇封板37℃、30min，用洗液洗3次。

（2）待检血清1∶1000稀释（宫颈黏液1∶100）每孔100μL，37℃温育60min，同上洗涤。

（3）1∶100生物素化羊抗人IgG，IgA或IgM，每孔100μL，37℃、60min，同上洗涤。

（4）1∶100酶标亲和素，每孔100μL，22℃温育30min，同上洗涤。

（5）每孔加底物100μL，37℃作用5～10min，加8mol/LH2SO450μL终止反应。

（6）用酶标检测仪测A490光密度（OD）值，为双份待测孔均值与双份阴性孔均值之差，血清取OD值0.20（宫颈黏液取0.10）作为AsAb阳性的判断标准。